2. Обзор литературы
2.1. Эпизоотология лейкоза, этиология и клинические признаки
Лейкоз у коров (Leucosis, гемобластоз) – это хроническая инфекционная болезнь, характеризующаяся неопластической пролиферацией клеток кроветворной и лимфоидной тканей с появлением в крови малодифференцированных клеток лимфоидного или миелоидного ряда.
Первые случаи лейкозов были описаны в Германии: у человека (Рудольф Вирхов, 1845), лошадей и свиней (Лейзеринг, 1858) и крупного рогатого скота (Зидамгродский, 1876). К настоящему времени лейкозы диагностированы как у теплокровных, так и холоднокровных животных. В разное время эту болезнь называли белокровием, лейкемией, раком крови, лейкозом и др. В последнее время ее стали называть гемобластозом, что наиболее полно отражает патогенетическую сущность болезни.
Большой вклад в изучение лейкозов внесли отечественные исследователи. А. Товаров (1862), К. Славянский и А. Щастнов (1867-1876) впервые указали на патоморфологическое и биологическое сходство лейкозного и опухолевого процессов. Вирусогенетическая теория происхождения злокачественных опухолей Л. А. Зильбера сейчас доминирующая; она подтверждается результатами исследования лейкозов крупного рогатого скота. В настоящее время лейкоз крупного рогатого скота объединяет опухолевые болезни кроветворных органов, а также лимфоидный, миелоидный и слабодифференцированный (гемоцитобластоз) лейкозы, лимфосаркому, ретикулосаркому, лимфогрануломатоз [11, 12, 13, 14].
Возбудителем лейкоза является РНК-содержащий онкогенный вирус типа С (онкорна-вирус), относящийся к роду Oncovirus С, семейства Retrovindae. Вирус лейкоза крупного рогатого скота, или бычий лейкозный вирус (БЛВ), морфологически сходен с возбудителями лейкоза у других видов животных. Однако имеются существенные различия в антигенном строении.
Устойчивость вируса лейкоза во внешней среде небольшая. Вирус в клеточных культурах при нагревании до 60° С погибает через минуту, быстро обезвреживается 2-3%-ми растворами едкого натра, формальдегида и другими дезинфицирующими веществами в общепринятых концентрациях. Инактивация вируса в молоке достигается нагреванием его до 74° С в течение 17 секунд или скисанием (рН 4,75). Вирус лейкоза может длительное время находиться в клетке в частично или полностью связанном состоянии с ее геномом. Патогенное действие он проявляет при снижении обменных процессов и иммунологической реактивности организма животных [15, 16].
Лейкозы наиболее распространены среди крупного рогатого скота. Болезнь диагностируют на всех континентах мира. Наиболее широко она распространена в Германии, Польше и США. Отмечена неравномерность поражения животных в отдельных странах и хозяйствах. Лейкозом болеют как молодые, так и взрослые животные всех разводимых пород и их помеси, но чаще он отмечается у животных 4-8-летнего возраста. Болезнь обычно наблюдается среди скота красной и черно-пестрой пород. К лейкозу КРС восприимчивы также овцы и козы. Эпидемиологическими и эпизоотологическими исследованиями не установлена связь между заболеваниями лейкозом человека и животных.
Источником возбудителя лейкоза является больное животное. Уже на ранних стадиях болезни онкорнавирус выделяется из организма коров с молозивом и молоком. Имеются сведения о возможном выделении возбудителя со слюной. Внутри стад возможны вертикальный (через плаценту, молозиво и молоко) и горизонтальный механизмы передачи возбудителя, однако конгенитальное заражение происходит сравнительно редко. Телята заражаются главным образом постнатально. Значение кровососущих насекомых, инфицированных предметов и других факторов в механизме передачи возбудителя лейкоза требует экспериментального подтверждения. Передачи вируса через сперму, по-видимому, не происходит.
В возникновении болезни существенное значение имеет гено- и фенотипическая предрасположенность животных к лейкозу. Время года, климатические и природно-географические условия не оказывают влияния на возникновение и распространение болезни. Основным фактором распространения возбудителя лейкоза в благополучных хозяйствах служит завоз молодняка из хозяйств, неблагополучных по этой болезни. Напряженность эпизоотического процесса связана с породой скота и интенсивностью использования животных. В отдельных хозяйствах заболеваемость составляет 3-20%, а летальность – до 15%.
Патогенез лейкоза определяется взаимоотношением вируса и клетки. Болезнь чаще протекает в латентной форме. Под влиянием различных экзогенных и эндогенных факторов происходит активация возбудителя, проявляющаяся у отдельных животных медленным расстройством регуляторной функции органов кроветворения. Основным признаком лейкоза является нарушение нормального процесса пролиферации и дифференциации клеток кроветворной ткани. Чаще поражаются лейкобластические клетки, что приводит к интенсивной пролиферации различных типов лейкоцитов в кроветворных органах, в костном мозге, селезенке, лимфоузлах. Неконтролируемо размножающиеся клетки крови распространяются по организму и попадают в различные органы и ткани, образуют опухоли, вызывающие изменение структуры и функции пораженных органов вследствие атрофии специфических клеток. Появляются нарушения на молекулярном, клеточном и органном уровнях, что приводит к расстройству кроветворения, увеличению количества лимфоцитов [17,18].
Инкубационный период (до появления изменений в периферической крови) при экспериментальном заражении длится 60-750 дней, а при спонтанном – 2-6 лет. В течении лейкозов выделяют предлейкозную, начальную, развернутую и терминальную стадии болезни. С развитием патологического процесса указанные стадии следуют одна за другой.
Предлейкозную стадию диагностируют при помощи серологических и вирусологических исследований, при этом никакие гематологические изменения еще не выявляются.
При начальной стадии лейкоза отмечают количественные и качественные сдвиги в составе клеток крови. Увеличивается количество лейкоцитов, повышается процент лимфоцитов, появляются малодифференцированные, незрелые, различной величины патологические формы клеток.
Развернутая стадия болезни характеризуется, кроме гематологических сдвигов, разнообразием неспецифических и специфических клинических признаков. Их проявление зависит от морфологических форм лейкоза и места локализации патологического процесса. У животного ухудшается общее состояние, отмечается быстрая утомляемость, плохо усваиваются корма, снижаются удои, прогрессирует истощение, нарушается пищеварение (диарея, запоры, атония, тимпания преджелудков), ослабляется сердечная деятельность. Наблюдаются цианоз и желтушность слизистых оболочек, ухудшается дыхание, появляются отеки области подгрудка, живота, вымени, хромота на одну или обе тазовые конечности, затрудняется выделение мочи, возникают аборты, наступает яловость, увеличивается одна или несколько долей вымени. Специфическими признаками лейкоза являются увеличение поверхностных (околоушных, надколенных, подчелюстных, надвыменных) внутренних (доступных ректальному исследованию) лимфоузлов; явление опухолевых разрастаний в различных областях тела, экфтальм (пучеглазие), увеличение селезенки и печени. Лимфоузлы имеют величину от грецкого ореха до детской головы, они безболезненны, эластичной или плотной консистенции. При сильном увеличении лимфоузлы становятся болезненными. Внутренние лимфоузлы поражаются чаще поверхностных. У молодняка наблюдаются также опухолевые разрастания в нижней части шеи, поражается тимус и возникают поражения кожи.
При терминальной стадии болезни быстро развивается патологический процесс. Отчетливо проявляются неспецифические признаки. Количество лейкоцитов в периферической крови иногда снижается, этом преобладают их патологические формы. Это приводит к крайнему истощению кроветворных органов, блокаде иммунной системы и заканчивается смертью животного.
У молодняка лейкоз протекает преимущественно остро; животное погибает через несколько недель после появления признаков болезни. У взрослого скота иногда смерть наступает внезапно вследствие разрыва селезенки. У таких животных не всегда замечают изменения в общем состоянии и продуктивности [19, 20, 21].
Осуществляемые в нашей стране с начала 90-х годов прошлого столетия коренные организационно-структурные и экономические преобразования в сфере агропромышленного комплекса повлекли за собой передел собственности, капитализацию сельскохозяйственного производства, оптово-розничной торговли и либерализацию в области торговли продуктовыми товарами.
В сельских районах и на урбанизированных территориях различных регионов страны возникли недостаточно оборудованные и не отвечающие требованиям ветеринарно-санитарных правил и норм, а нередко и вовсе несанкционированные, места торговли продовольственными товарами и готовыми к употреблению продуктами питания для человека. Существенным образом снизилась действенность и эффективность государственного ветеринарно-санитарного надзора и контроля их качества и безопасности. Воздействие сильнейшего энергетического, экологического и, особенно, экономического прессинга, ярко выраженный диспаритет цен на промышленные и сельскохозяйственные товары оказали негативное влияние на рост и развитие животноводства, породили тенденции деградации этой жизненно важной отрасли экономики, как в отдельных регионах, так и в стране в целом. По ряду позиций Россия утратила свою национальную продовольственную безопасность. Во избежание резкого снижения уровня обеспечения населения продуктами питания и прежде всего продуктами животного происхождения, она вынуждена в разы увеличивать объемы импорта и интенсифицировать межрегиональные перемещения продовольственных товаров и сырья внутри страны. Наполнение продовольственного рынка России импортными продуктами и сырьем животного происхождения значительно увеличило риск возникновения и распространения инфекционных и инвазионных заболеваний, в том числе и общих для людей и животных (зооантропонозов). В этих условиях сложившаяся к 1990 году постоянно совершенствующаяся и долгие годы безупречно функционирующая государственная комплексная система ветеринарно-санитарного контроля качества и безопасности [21, 22, 23, 24, 25, 26].
Молоко здоровых коров является важнейшим продуктом питания и сырьем, широко применяемый в пищевой промышленности. Молоко должно подвергаться тщательному контролю по всем основным показателям: органолептическим, физико-химическим, микробиологическим и др., не только для определения его биологической полноценности и безопасности, но и для выяснения его сырьевой ценности.
Энзоотический лейкоз крупного рогатого скота относится к заболеванию, не подлежащих терапии и специфической профилактики. Экзотический лейкоз крупного рогатого скота наносит значительный экономический ущерб животноводству, обусловленный снижением племенной ценности и выбраковкой животных, недополучением молодняка и молочной продукции. В частности, удой молочных коров, инфицированных вирусом энзоотического лейкоза, снижается на 14-15 %, а в ряде случаев на 25%, на фоне ухудшения качества получаемого молока [27,28,29].
Интенсификация скотоводства и применение промышленных технологий значительно повышает нагрузку на организм коровы и, следовательно, напряжение её функциональности. Имеющиеся технологические условия содержания не всегда соответствуют физиологическим потребностям животных, и в этой ситуации возникают болезни, в основе которых лежит нарушение обмена веществ и появление инфекционных болезней.
Среди комплекса внешних условий, которые влияют на физико-химические параметры молока и его биологическую ценность, кормлению молочного скота следует уделять особое внимание. Корма, применяемые в рационах, не только напрямую влияют на организм коров через микробиологические процессы, которые происходит в рубце, ни и на протяжении всего цикла пищеварения [30,31,32].
2.3. Первичная обработка и ветеринарно-санитарное экспертиза молока в хозяйствах, его хранение и транспортировка
Ветеринарно-санитарная оценка молока, полученного от больных инфекционными болезнями коров.
Важными факторами эффективного использования коров и получения качественного молока является правильная организация их доения. Доят коров в стойле с помощью переносных доильных аппаратов в скотных дворах или площадках, а также в доильных залах и доильных площадках типа «Елочка», «Тандем», «Карусель».
На любой ферме по производству молока, кроме оснащенного доильными установками молочного зала, должны быть помещения и оборудование для приема (очистки, включая пастеризацию), охлаждения и кратковременного хранения молока; моечная (с оборудованием для автоматической мойки и дезинфекции молочного оборудования и фляг), помещение для приготовления и хранения моющих и дезинфицирующих средств; вакуум-насосная и лаборатория для определения качества молока.
Процесс машинного доения коров включают подготовку доильного аппарата и вымени коров к доению, непосредственно процесс доения (надевание доильных стаканов, контроль за процессом доения, машинное додаивание и снятие доильных стаканов).
Для санитарной подготовки вымени перед надеванием доильных стаканов необходимо сдоить первые 2-3 струйки молока (продолжительность 5-6 сек), обмыть вымя чистой теплой (40-45°С) водой из разбрызгивателя или ведра (продолжительность 6-8 сек) и провести массаж (15-25 сек).
Первые струйки молока сдаивают в специальную кружку или на темную пластину разбрызгивателя. Сдаивание позволяет освободить сосковый канал от молочной пробки с повышенной бактериальной обсемененностью, обнаружить признаки заболевания коров маститом (наличие в молоке хлопьев, примеси крови, слизи) и другие изменения, а также проверить припуск молока.
При сдаивании первых струек молока и обмывании вымени осматривают и ощупывают вымя, обращая внимание, нет ли покраснения, припухлости, уплотнения, ранок на вымени и сосках.
Вытирают вымя чистым полотенцем, протирают соски, особенно зону сфинктера, и, охватывая соски руками, подталкивают их снизу вверх для усиления рефлекса молокоотдачи.
Для полноценного проявления рефлекса молокоотдачи на разных стадиях лактации необходимо проводить массаж в зависимости от степени наполненности вымени. При доении коров, у которых не возбужден полноценный рефлекс молокоотдачи или произошло торможение рефлекса в начале доения, резко снижается скорость выведения молока, затягивается время доения и происходит неполное выдаивание. В результате этого в вымени может остаться до 30 % молока.
В процессе доения внимательно следят за поведением коров и поступлением молока через смотровое устройство доильного аппарата.
В случае спадания стаканов с сосков отключают аппарат от вакуума, ополаскивают загрязненные стаканы водой и снова надевают на соски.
При исчезновении напряжения вымени, значительном уменьшении или прекращении потока молока, проводят машинное додаивание.
После доения соски вымени смазывают или смачивают специальной антисептической эмульсией. Это предотвращает попадание микробов внутрь соска и вымени в первые часы после доения, ко гда сфинктер соска находится еще в открытом состоянии. Для обработки сосков после доения применяют 0,1%-ный раствор однохлористого йода, 0,2%-ный тестостерила, 0,5%-ный дезмола, а также специальный препарат хиносепт, «Дипал» (Швеция). Соски погружаются в дезинфицирующий раствор на 2-3 секунды.
Для получения молока высокого качества все молочное оборудование (доильные установки, охладители, емкости для хранения молока, ведра, подойники, цедилки, фильтры) должно подвергаться санитарной обработке сразу же по окончании производственного процесса. Для удаления механических загрязнений (навоз, частицы подстилки) доильные аппараты снаружи обмывают теплой водой, затем размещают в устройстве для промывания. Санитарную обработку проводят в следующем порядке:
? ополаскивание линии проточной теплой водой до полного удаления остатков молока;
? циркуляционное промывание 10-120 мин горячим 0,25% раствором моюще-дезинфицирующего вещества;
? заключительное ополаскивание водопроводной водой для удаления остатков моюще-дезинфицирующего раствора.
Один раз в сутки коллекторы доильных аппаратов разбирают и промывают вручную с использованием ершей. Хранить доильные аппараты и молочную посуду в коровнике запрещается. В промежутке между доениями доильные аппараты подвешивают на специальный стеллаж в молочной.
Для мойки молочного оборудования применяют синтетические моющие порошки типа А, Б, В. В случае недостатка моющих средств можно применять 1% горячий раствор кальцинированной соды.
К моюще-дезинфицирующим средствам относятся гипохлорит натрия (0,01% конц.), дезмол (0,25-0,5% конц.), сульфохлорантин (0,3% конц.) и кислотное моюще-дезинфицирующее средство (0,5- 1,0% конц.)
Первичная обработка молока на фермах проводится в специальных помещениях - молочных. Оно должно быть очищено (профильтровано) не позднее, чем через 2 часа после его получения.
Фильтрование является самым распространенным и наиболее простым способом очистки молока на фермах. При доении коров в стойлах в переносные ведра и сливе молока во фляги его пропускают через фильтры и цедилки, которые помещают на горловину фляги. В качестве фильтров используют ватные круги, которые прокладывают между двумя металлическими сетками, а также фильтры из лавсана, фланели, марли, типа «спан-бонд». Один фильтр можно использовать для очистки 35-40 л молока, затем ватный фильтр уничтожают, а тканевые - обрабатывают.
После дойки фильтрующий элемент обрабатывается по следующей схеме:
? промыть в теплой воде для удаления остатков молока и грязи;
? выстирать в горячем 0,5%-ном моющем растворе при температуре 45-50°С;
? ополоснуть в чистой теплой воде;
? продезинфицировать в дезрастворе.
Чистые фильтры сушат и хранят на стеллажах для молочной посуды в молочной комнате.
На доильных установках с молокопроводом очистка осуществляется в потоке с помощью нарукавного фильтра из ткани типа «спан-бонд».
В свежевыдоенном молоке количество микробов некоторое время не только не увеличивается, а даже несколько уменьшается. Это свойство парного молока называется бактери- цидностью, а продолжительность действия этих свойств - бактерицидной фазой. Если молоко после доения не охладить, то оно через 2-3 ч теряет свои бактерицидные свойства и начинает скисать.
Согласно ТР ФЗ-88, «Сырое молоко после доения сельскохозяйственных животных должно быть очищено и охлаждено до температуры 4 градуса Цельсия плюс-минус 2 градуса Цельсия в течение 2 часов».
В условиях фермской молочной применяются различные способы охлаждения молока: помещение фляг с молоком в бассейны с проточной водой, использование охладителей, ванн и танков. Охлаждение основано на теплообмене между хладагентом и теплым молоком.
Широкое распространение на фермах получили резервуары (ванны и танки) для охлаждения молока. При этом не требуются фляги. Ванны и танки изготовляют из нержавеющей стали; они имеют прямоугольную или цилиндрическую форму. Охлаждение осуществляется или поступающим в межстеночное пространство хладагентом (фреон) или хладоносителем (вода, рассол). Вместимость резервуаров - от одной до нескольких тонн молока. Каждый из резервуаров оборудуется автоматической мешалкой. Более эффективно можно использовать такие холодильные установки, если молоко предварительно охладить на пластинчатых охладителях.
Молоко утреннего и дневного удоя охлаждают до температуры 4±2°С. Такой способ охлаждения позволяет хранить на ферме до отправки на завод молоко вечернего удоя без изменения качества и смешивать его с молоком утреннего и дневного удоя.
Если молоко нельзя сразу доставить на приемный пункт, его хранят в хозяйстве при той же температуре, до которой оно было охлаждено, и в тех же емкостях, в хорошо проветриваемом помещении с затемненными окнами. Согласно ТР, «Допускается хранение сырого молока, сырого обезжиренного молока (включая период хранения сырого молока, используемого для сепарирования) при температуре 4 градуса Цельсия плюс-минус 2 градуса Цельсия не более чем 36 часов с учетом времени перевозки, хранение сырых сливок при температуре не выше 8 градусов Цельсия не более чем 36 часов с учетом времени перевозки, за исключением хранения сырого молока, сырого обезжиренного молока (включая период хранения сырого молока, используемого для сепарирования), сырых сливок, предназначенных для производства продуктов детского питания на молочной основе (для детей раннего возраста), молочных смесей (в том числе сухих молочных смесей), молочных напитков (в том числе сухих молочных напитков), молочных каш, которые должны храниться при температуре 4 ?С».
Молоко перевозят специализированными транспортными средствами в соответствии с правилами перевозок скоропортящихся грузов, действующими на данном виде транспорта.
Молоко транспортируют в цистернах для пищевых жидкостей, металлических флягах и других видах тары, разрешенных органами здравоохранения России для контакта с молоком и молочными продуктами.
Крышки тары закрывают герметично. Запорные устройства крышек пломбируют пломбами. Охлаждение осуществляется или поступающим в межстеночное пространство хладагентом (фреон) или хладоносителем (вода, рассол). Вместимость резервуаров - от одной до нескольких тонн молока. Каждый из резервуаров оборудуется автоматической мешалкой. Более эффективно можно использовать такие холодильные установки, если молоко предварительно охладить на пластинчатых охладителях.
Молоко утреннего и дневного удоя охлаждают до температуры 4±2°С. Такой способ охлаждения позволяет хранить на ферме до отправки на завод молоко вечернего удоя без изменения качества и смешивать его с молоком утреннего и дневного удоя.
Хранение молока на ферме. Если молоко нельзя сразу доставить на приемный пункт, его хранят в хозяйстве при той же температуре, до которой оно было охлаждено, и в тех же емкостях, в хорошо проветриваемом помещении с затемненными окнами. Согласно ТР, «Допускается хранение сырого молока, сырого обезжиренного молока (включая период хранения сырого молока, используемого для сепарирования) при температуре 4 градуса Цельсия плюс-минус 2 градуса Цельсия не более чем 36 часов с учетом времени перевозки, хранение сырых сливок при температуре не выше 8 градусов Цельсия не более чем 36 часов с учетом времени перевозки, за исключением хранения сырого молока, сырого обезжиренного молока (включая период хранения сырого молока, используемого для сепарирования), сырых сливок, предназначенных для производства продуктов детского питания на молочной основе (для детей раннего возраста), молочных смесей (в том числе сухих молочных смесей), молочных напитков (в том числе сухих молочных напитков), молочных каш, которые должны храниться при температуре 4 градуса Цельсия».
Молоко перевозят специализированными транспортными средствами в соответствии с правилами перевозок скоропортящихся грузов, действующими на данном виде транспорта.
Молоко транспортируют в цистернах для пищевых жидкостей, металлических флягах и других видах тары, разрешенных органами здравоохранения России для контакта с молоком и молочными продуктами.
Крышки тары закрывают герметично. Запорные устройства крышек пломбируют пломбами.
Молоко транспортируют при его температуре от 2 °С до 8 "С не более 12 ч.
Согласно ТР, «Во время перевозки охлажденных сырого молока, сырого обезжиренного молока или сырых сливок к месту переработки вплоть до начала их переработки температура таких продуктов не должна превышать 10 градусов Цельсия. Сырое молоко, сырое обезжиренное молоко и сырые сливки, не соответствующие установленным требованиям к их температуре, подлежат немедленной переработке».
Ветеринарно-санитарная экспертиза молока, полученного от больных коров. Больных лейкозом коров (при положительных результатах гематологических исследований) сдают на убой. Молоко от инфицированных и остальных коров оздоровляемого стада сдают на молокоперерабатывающий завод или используют внутри хозяйства после пастеризации в обычном технологическом режиме. После обеззараживания молоко используется без ограничений.
При выявлении больных животных в индивидуальных хозяйствах их подвергают убою, а остальное поголовье содержат изолированно от животных, принадлежащих другим владельцам неблагополучного населенного пункта. Молоко и молочные продукты запрещается реализовывать в свободной продаже [33, 34, 35, 36].
?
3. РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ
3.1. Материалы и методы исследований
Работа выполнена в период с 2020 по 2021 гг на кафедре ветеринарно-санитарной экспертизы, хирургии и акушерства Горского государственного аграрного университета, в СК «Радуга» и в ветеринарной станции по борьбе с болезнями животных Пригородного района Республики Северная Осетия – Алания.
Объектом исследований служили коровы, больные энзоотическим лейкозом.
Материалом для определения пищевой ценности и биологической безопасности молока, полученного от инфицированных коров, являлись пробы цельного молока, полученного от молочных коров 3-8 лет, инфицированных вирусом энзоотического лейкоза коров.
