Онлайн поддержка
Все операторы заняты. Пожалуйста, оставьте свои контакты и ваш вопрос, мы с вами свяжемся!
ВАШЕ ИМЯ
ВАШ EMAIL
СООБЩЕНИЕ
* Пожалуйста, указывайте в сообщении номер вашего заказа (если есть)

Войти в мой кабинет
Регистрация
ГОТОВЫЕ РАБОТЫ / СТАТЬЯ, РАЗНОЕ

Иммобилизация как путь повышения эффективности и стабильности

Workhard 30 руб. КУПИТЬ ЭТУ РАБОТУ
Страниц: 5 Заказ написания работы может стоить дешевле
Оригинальность: неизвестно После покупки вы можете повысить уникальность этой работы до 80-100% с помощью сервиса
Размещено: 24.09.2021
Иммобилизация как путь повышения эффективности и стабильности Высокая лабильность Ф к различным факторам окружающей среды (значению pH, температуре), быстрая инактивация в организме и выделение из организма, наличие антигенных свойств чужеродных организму белков – в значительной мере могут быть устранены при использовании Ф в иммобилизованном виде. Иммобилизация Ф – это повышение их стабильности. Существует несколько общепринятых методов иммобилизации Ф, которую проводят в строго асептических условиях, но ни один из существующих методов иммобилизации биологически активных молекул, таких, как Ф, антитела, антигены, не является универсальным. Самый простой способ иммобилизации Ф – физический метод (адсорбция на нерастворимом носителе). В основе метода лежат действия электростатических сил и сил поверхностного натяжения. Процедура иммобилизации состоит в смешивании при соответствующих условиях Ф и носителя, инкубации и отделении нерастворимого компонента смеси от растворимого центрифугированием или фильтрованием. Недостаток этого метода – непрочная связь Ф с носителем. Например, адсорбция Ф на носителе ДЭАЭ — сефадекс (диэтиламиноэтил) осуществляется за счёт множественных солевых связей. На такого рода связи влияют даже незначительные изменения pH, ионной силы, температуры и природы растворителя, что может приводить к десорбции фермента с носителя, десорбцию Ф может вызвать даже субстрат. Кроме солевых связей во взаимодействии Ф с носителем могут участвовать и другие слабые силы, например, водородные или ван-дер-ваальсовые. Материалы, используемые для адсорбции Ф: алюминия оксид, бентонит, кальция карбонат, гель кальция фосфата, активированный уголь, целлюлоза, глина белая, коллаген, ионно-обменные смолы, фенольные полимеры, силикагель. Адсорбция – мягкий метод иммобилизации, который, как правило, слабо влияет на каталитическую активность Ф. Иммобилизация ферментов с помощью ковалентного связывания считается мягким методом. Способ основан на образовании химической связи между молекулами Ф и носителя. При этом важно, чтобы аминокислоты, необходимые для проявления каталитической активности Ф, не участвовали в ковалентном связывании с носителем. Способ ковалентной иммобилизации может приводить к снижению ферментативной активности. Инактивацию можно предотвратить, проводя иммобилизацию в присутствии субстрата, защищающего активный центр. Типичные водонерастворимые носители, используемые для ковалентной иммобилизации — агароза (сефароза), целлюлоза, декстран (сефадекс), сополимеры полиакриламида, полиаминостирол. Для ковалентного присоединения требуется предварительная активация носителя. Активированный носитель может реагировать с определёнными группами Ф: ?- и ?-аминогруппами остатков лизина, функциональными группами остатков тирозина, гистидина, аргинина, цистеина. Например, носитель сефароза активирована бромцианом, что основано на реакции между бромцианом и гидроксильными группами сефарозы, образующиеся при этом имидокарбонатные группы могут реагировать со свободными аминогруппами Ф. Для определения количества Ф, иммобилизованного на носителе, измеряют ферментативную активность исходного раствора, который инкубирован с носителем, и активность, остающуюся в растворе после завершения процесса иммобилизации. Разность между этими активностями соответствует теоретическому или максимальному количеству иммобилизованного Ф.
Введение

Иммобилизация как путь повышения эффективности и стабильности Высокая лабильность Ф к различным факторам окружающей среды (значению pH, температуре), быстрая инактивация в организме и выделение из организма, наличие антигенных свойств чужеродных организму белков – в значительной мере могут быть устранены при использовании Ф в иммобилизованном виде. Иммобилизация Ф – это повышение их стабильности. Существует несколько общепринятых методов иммобилизации Ф, которую проводят в строго асептических условиях, но ни один из существующих методов иммобилизации биологически активных молекул, таких, как Ф, антитела, антигены, не является универсальным. Самый простой способ иммобилизации Ф – физический метод (адсорбция на нерастворимом носителе). В основе метода лежат действия электростатических сил и сил поверхностного натяжения. Процедура иммобилизации состоит в смешивании при соответствующих условиях Ф и носителя, инкубации и отделении нерастворимого компонента смеси от растворимого центрифугированием или фильтрованием. Недостаток этого метода – непрочная связь Ф с носителем. Например, адсорбция Ф на носителе ДЭАЭ — сефадекс (диэтиламиноэтил) осуществляется за счёт множественных солевых связей. На такого рода связи влияют даже незначительные изменения pH, ионной силы, температуры и природы растворителя, что может приводить к десорбции фермента с носителя, десорбцию Ф может вызвать даже субстрат. Кроме солевых связей во взаимодействии Ф с носителем могут участвовать и другие слабые силы, например, водородные или ван-дер-ваальсовые. Материалы, используемые для адсорбции Ф: алюминия оксид, бентонит, кальция карбонат, гель кальция фосфата, активированный уголь, целлюлоза, глина белая, коллаген, ионно-обменные смолы, фенольные полимеры, силикагель. Адсорбция – мягкий метод иммобилизации, который, как правило, слабо влияет на каталитическую активность Ф. Иммобилизация ферментов с помощью ковалентного связывания считается мягким методом. Способ основан на образовании химической связи между молекулами Ф и носителя. При этом важно, чтобы аминокислоты, необходимые для проявления каталитической активности Ф, не участвовали в ковалентном связывании с носителем. Способ ковалентной иммобилизации может приводить к снижению ферментативной активности. Инактивацию можно предотвратить, проводя иммобилизацию в присутствии субстрата, защищающего активный центр. Типичные водонерастворимые носители, используемые для ковалентной иммобилизации — агароза (сефароза), целлюлоза, декстран (сефадекс), сополимеры полиакриламида, полиаминостирол. Для ковалентного присоединения требуется предварительная активация носителя. Активированный носитель может реагировать с определёнными группами Ф: ?- и ?-аминогруппами остатков лизина, функциональными группами остатков тирозина, гистидина, аргинина, цистеина. Например, носитель сефароза активирована бромцианом, что основано на реакции между бромцианом и гидроксильными группами сефарозы, образующиеся при этом имидокарбонатные группы могут реагировать со свободными аминогруппами Ф. Для определения количества Ф, иммобилизованного на носителе, измеряют ферментативную активность исходного раствора, который инкубирован с носителем, и активность, остающуюся в растворе после завершения процесса иммобилизации. Разность между этими активностями соответствует теоретическому или максимальному количеству иммобилизованного Ф.
Содержание

Иммобилизация ферментов металлохелатным методом. Для этой цели используют свойства переходных металлов образовывать комплексы. В качестве переходных металлов используют титана хлорид чистый иди в кислом растворе, гидроксиды титана, циркония, хрома (их оксиды не токсичны), железа, ванадия, олова. В качестве носителей – производные целлюлозы и силикагели (с соответстветствующим размером пop), глутаровый альдегид. Гелеобразные гидратированные оксиды металлов образуют с Ф нерастворимые комплексы, обладающие хорошей ферментативной активностью. На полисахаридных носителях, именно целлюлозе, получают препараты иммобилизованных Ф с наиболее высокой тивностью. Например, хелатный комплекс титана хлорида и целлюлозы (D- глюкопиранозы); гидроксильные группы в положении 6 D-глюкопиранозы, взаимодействуя с ионами титана, образуют полимерный хелат. В нейтральном водном растворе между полимером, активированным титана хлоридом, и Ф образуется ковалентная связь, далее смесь должна быть полностью высушена. Температура высушивания избирательна, но она не должна превышать 50 °С, обычно активирование носителя проводят под вакуумом. Связывание Ф с титановыми комплексами полимеров происходит в молекуле Ф по свободным карбоксильным группам кислых аминокислот, фенольным гидроксилам остатков тирозина, спиртовым гидроксильным группам остатков серина и треонина, свободным сульфгидрильным группам остатков цистеина, ?-аминогруппам остатков лизина.
Список литературы

Иммобилизация клеток и ферментов с включением в гель относится к механическим методам. Гель, в который включают клетки, как правило, состоит из сферических частиц. Включение живых клеток и Ф требует мягких условий иммобилизации, ниситель должен представлять систему пор с хорошими условиями для газообмена. Включение клеток в полиакриламидный гель. Полиакриламид (ПАА) – носитель, чаще других используемый для включения Ф, так как он не обладает ионно-обменными свойствами, поэтому при иммобилизации pH-профиль активности Ф практически не меняется. Для удерживания включённых белков с носителем требуется высокая степень сшивки носителя, т.е. полная полимеризация. Важным фактором при этом является удаление кислорода из раствора. Включение клеток в гель кальция альгината. Альгинат – основной структурный полисахарид бурых морских водорослей. Моновалентные катионы полисахарида даже в низких концентрациях образуют вязкий раствор в присутствии двухвалентных катионов, особенно кальция, что способствовало широкому применению альгината для иммобилизации живых клеток. Ионы кальция можно заменить другими двухвалентными катионами, например бария. Важно отсутствие в системе хелатирующих агентов, таких, как фосфаты и цитраты, разрушающие структуру геля, связывая кальций.
Отрывок из работы

Иммобилизация ферментов металлохелатным методом. Для этой цели используют свойства переходных металлов образовывать комплексы. В качестве переходных металлов используют титана хлорид чистый иди в кислом растворе, гидроксиды титана, циркония, хрома (их оксиды не токсичны), железа, ванадия, олова. В качестве носителей – производные целлюлозы и силикагели (с соответстветствующим размером пop), глутаровый альдегид. Гелеобразные гидратированные оксиды металлов образуют с Ф нерастворимые комплексы, обладающие хорошей ферментативной активностью. На полисахаридных носителях, именно целлюлозе, получают препараты иммобилизованных Ф с наиболее высокой тивностью. Например, хелатный комплекс титана хлорида и целлюлозы (D- глюкопиранозы); гидроксильные группы в положении 6 D-глюкопиранозы, взаимодействуя с ионами титана, образуют полимерный хелат. В нейтральном водном растворе между полимером, активированным титана хлоридом, и Ф образуется ковалентная связь, далее смесь должна быть полностью высушена. Температура высушивания избирательна, но она не должна превышать 50 °С, обычно активирование носителя проводят под вакуумом. Связывание Ф с титановыми комплексами полимеров происходит в молекуле Ф по свободным карбоксильным группам кислых аминокислот, фенольным гидроксилам остатков тирозина, спиртовым гидроксильным группам остатков серина и треонина, свободным сульфгидрильным группам остатков цистеина, ?-аминогруппам остатков лизина.
Условия покупки ?
Не смогли найти подходящую работу?
Вы можете заказать учебную работу от 100 рублей у наших авторов.
Оформите заказ и авторы начнут откликаться уже через 5 мин!
Служба поддержки сервиса
+7 (499) 346-70-XX
Принимаем к оплате
Способы оплаты
© «Препод24»

Все права защищены

Разработка движка сайта

/slider/1.jpg /slider/2.jpg /slider/3.jpg /slider/4.jpg /slider/5.jpg