Войти в мой кабинет
Регистрация
ГОТОВЫЕ РАБОТЫ / КУРСОВАЯ РАБОТА, АВТОМАТИЗАЦИЯ ТЕХНОЛОГИЧЕСКИХ ПРОЦЕССОВ

Автоматизированный анализ крови, принципы организации и проведения исследования

irina_k200 324 руб. КУПИТЬ ЭТУ РАБОТУ
Страниц: 27 Заказ написания работы может стоить дешевле
Оригинальность: неизвестно После покупки вы можете повысить уникальность этой работы до 80-100% с помощью сервиса
Размещено: 11.09.2020
Целью курсовой работы является исследование автоматизированного анализа крови принципы организации и проведения исследования. Для достижения цели курсовой работы необходимо решить ряд задач: - рассмотреть материал для проведения общего клинического анализа крови; - раскрыть автоматизированное исследование клеток крови; - охарактеризовать подсчет эритроцитов и тромбоцитов, расчет величины гематокрита, эритроцитарных и тромбоцитарных индексов; - рассмотреть определение гемоглобина. Методы исследования: анализ, синтез, литературный. При написании курсовой работы были использованы труды отечественных ученых таких как: Структура курсовой работы состоит из введения, двух глав, заключения и списка используемой литературы.
Введение

Общий анализ крови (ОАК) предоставляет клиницистам важнейшую информацию, т. к. характеризует физиологическое состояние организма, изменяющееся под воздействием различных внешних и внутренних факторов, является неотъемлемой частью диагностического процесса и последующего мониторинга на фоне проводимой терапии. В 1895 году швейцарский врач Сали впервые предложил колориметрический метод определения концентрации гемоглобина в крови,прошло более века, однако до сих пор общий анализ крови не потерял значимости, актуальности. Развитие прикладных медицинских наук усовершенствовало подход к этому исследованию, но не изменило его сути. По-прежнему врачей интересует концентрация гемоглобина, количество эритроцитов, лейкоцитов и тромбоцитов в единице объема крови, скорость оседания эритроцитов (СОЭ) и лейкоцитарная формула. На смену рутинному подсчету клеток в счетной камере и визуальному определению гемоглобина в гемометре Сали пришли новые технологии, реализованные в гематологических анализаторах. Помимо общеизвестных показателей, использование анализаторов позволило пополнить ОАК новыми диагностически значимыми параметрами, которые расширили понимание процессов, происходящих в крови в норме и при патологиях, стало реальным предоставлять значительно больше клинической информации о состоянии кроветворной системы и реагировании ее на различные внешние и внутренние факторы.
Содержание

ВВЕДЕНИЕ………………………………………………………………………..3 ГЛАВА 1. ОБЩАЯ ЧАСТЬ………………………………………………………5 1.1 Материал для проведения общего клинического анализа крови…………..5 1.2 Автоматизированное исследование клеток крови………………………….5 ГЛАВА 2. СПЕЦИАЛЬНАЯ ЧАСТЬ…………………………………………...10 2.1 Подсчет эритроцитов и тромбоцитов, расчет величины гематокрита, эритроцитарных и тромбоцитарных индексов………………………………...10 2.2 Подсчет и дифференцировка лейкоцитов………………………………….13 2.3 Основные реагенты кондуктометрических анализаторов………………...15 2.4 Метод проточной цитофлюрометрии………………………………………18 2.5 Определение гемоглобина…………………………………………………..21 2.6 Качество результатов исследования крови на гематологическом анализаторе………………………………………………………………………24 ЗАКЛЮЧЕНИЕ………………………………………………………………….26 СПИСОК ИСПОЛЬЗУЕМОЙ ЛИТЕРАТУРЫ………………………………...28
Список литературы

1. Балаховский И. С. Достоверность подсчета лейкоцитарной формулы. Лабораторная диагностика 2007. - №2. – с. 14. 2. Козинец Г.И., Погорелов В.М., Шмаров Д.А. « Клетки крови - современные технологии их анализа» М, "Триада-Фарм", 2002. 3. Кишкун А. А. Современные технологии повышения качества и эффективности клинической лабораторной диагностики. – М.: РАМЛД, 2005. - 528 с. 4. Луговская С.А., Морозова В.Т., Почтарь М.Е., Долгов В.В. «Лабораторная гематология» М., "Триада", 2006. 5. Соснин Д. Ю., Фалков Б. Ф., Ненашева О. Ю. Оценка правильности распознавания клеток системой автоматического анализа крови Vision Hema//Уральский медицинский журнал. 2012. - № 13 (105). - С. 131 – 135., 140. 6. Муханов В. С. «Проточная цитометрия». Севастополь, «Экологический журнал», 2011. 7. Медовый В. С. Писаренко Л. Новые возможности автоматизированной микроскопии // Справочник заведующего КДЛ. 2008 - №2 - С. 29 – 31. 8. Медовый В. С. Пятницкий А. М., Соколинский Б. З. Балугян Р. Ш. Современные возможности роботизированной микроскопии в автоматизации анализов и лабораторной телемедицине (аналитический обзор) // Клиническая лабораторная диагностика, 2012. - №6. - С. 37–40. 9. Бажибина Е. Б. «Критерий оценки автоматического оборудования для гематологических исследований» М. «Лабораторная диагностика», 2012.
Отрывок из работы

ГЛАВА 1. ОБЩАЯ ЧАСТЬ 1.1 Материал для проведения общего клинического анализа крови общий клинический анализ кровь Венозная кровь считается оптимальным материалом для клинического исследования. Это обусловлено тем, что при известной стандартизации процессов забора, хранения, транспортировки крови удается добиться минимальной травматизации и активации клеток, примеси других веществ (тканевой жидкости), при этом всегда имеется возможность повторить и/или расширить анализ. Пункция кожи с целью получения капиллярной крови является процедурой выбора в тех ситуациях, когда получение венозной крови невозможно (у новорожденных, ожоговых больных, при выраженном ожирении, спавшихся венах). Однако следует помнить, что при прохождении капиллярной крови через поврежденную ткань активируются процессы свертывания крови, а с тканевой жидкостью в образец попадает большое количество тромбопластина, что влечет за собой образование в пробирке микросгустков. Что касается нормальных значений основных показателей крови, то нет указаний на какие-либо достоверные различия в клеточном составе венозной и капиллярной крови, а также в концентрации гемоглобина и СОЭ. 1.2 Автоматизированное исследование клеток крови Высокотехнологические гематологические анализаторы способны измерять более 32 параметров крови, осуществлять полный дифференцированный подсчет лейкоцитов по 5-ти основным популяциям: нейтрофилы, эозинофилы, базофилы, моноциты и лимфоциты. Аналитические возможности гематологических анализаторов: - высокая производительность (до 100-120 проб в час) - небольшой объем крови для анализа (12-150 мкл) - анализ большого количества (десятки тысяч) клеток - высокая точность - оценка 18-30 и более параметров - графическое представление результатов в виде гистограмм,скатерограмм. Гематологические анализаторы имеют систему обозначения - флаги или "сигналы тревоги" - указывающую на отклонение параметров от установленных границ. Они могут касаться как увеличения или уменьшения количества тех или иных клеток, так и изменения их функционального состояния, которое отражается на характеристиках измеряемых прибором клеток. Диагностические возможности гематологических анализаторов: - оценка состояния гемопоэза - диагностика и дифференциальная диагностика анемий - диагностика воспалительных заболеваний - оценка эффективности проводимой терапии - мониторинг за мобилизацией стволовых клеток из костного мозга. Несмотря на все достоинства, даже самые современные гематологические анализаторы обладают некоторыми ограничениями, которые касаются точной морфологической оценки патологических клеток (например, при лейкозах), и не в состоянии полностью заменить световую микроскопию. Автоматические счетчики крови оценивают размеры, структурные, цитохимические и другие характеристики клеток. Они анализируют около 10000 клеток в одном образце и имеют несколько различных каналов подсчета клеточных популяций и концентрации гемоглобина. На основании количества определяемых параметров и степени сложности их можно условно разделить на 3 основных класса: I класс - автоматические гематологические анализаторы, определяющие до 20 параметров, включая расчетные показатели красной крови и тромбоцитов, гистограммы распределения лейкоцитов, эритроцитов и тромбоцитов по объему, а так же частичную дифференцировку лейкоцитов на три популяции - лимфоциты, моноциты и гранулоциты. II класс - высокотехнологичные гематологические анализаторы, позволяющие проводить развернутый анализ крови, в том числе полную дифференцировку лейкоцитов по 5-ти параметрам (нейтрофилы, эозинофилы, базофилы, моноциты и лимфоциты), гистограммы распределения лейкоцитов, эритроцитов и тромбоцитов по объему, скатерограммы. III класс - сложные аналитические системы, выполняющие не только развернутый анализ крови с дифференцировкой лейкоцитов по 5 параметрам, но и подсчет и анализ ретикулоцитов, некоторых субпопуляций лимфоцитов; В основе работы анализаторов I-го класса лежит кондуктометрический метод. Анализаторы II и III-го классов используют в своей работе комбинации разных методов. 1. Кондуктометрические гематологические анализаторы Рис. 1. Схема регистрации клеток, проходящих через апертуру Апертуро-импедансный метод (метод Культера или кондуктометрический метод) основан на подсчете числа и определении характера импульсов, возникающих при прохождении клеток через отверстие малого диаметра (апертуру), по обе стороны которого расположены два изолированных друг от электрода. Рис. 2. Принцип "Культера", схема строения. Если через узкий канал, заполненный электропроводящим раствором, проходит клетка крови, то в этот момент сопротивление электрическому току в канале возрастает. Несмотря на то, что изменение сопротивления невелико, современные электронные приборы легко его улавливают. 1. электрод 2. апертурная ванна 3. апертура 4. корпус апертуры 5. суспензия клеток 6. электрод 7. вакуум 8. прохождение потока 9. Апертура В пространстве апертуры возникает так называемая «чувствительная зона», проходя через которую, каждая частица/клетка вытесняет определенное количество электролита, вызывая импульсное возрастание сопротивления. В результате происходит небольшое изменение величины электрического тока в усилителе, который преобразует колебания силы тока в импульсы напряжения, которые находятся в прямой зависимости от размера прошедшей через апертуру клетки. Чем крупнее клетка, тем выше значение импульса. Чтобы определить концентрацию клеток, достаточно пропустить определенный объем пробы через канал и подсчитать число электрических импульсов, которые при этом генерируются. Если в один и тот же момент в канале находятся две клетки, они регистрируются в виде одного импульса, что приведет к ошибке подсчета клеток. Во избежание этого, проба крови разводится до такой концентрации, при которой в канале датчика всегда будет не больше одной клетки. Первичный фокусирующий поток заставляет клетки проходить через апертуру одной цепочкой, а вторичный предотвращает возврат к апертуре уже подсчитанных клеток. Эти сфокусированные клетки измеряются по сопротивлению постоянному току, проходящему между электродами, которые расположены по разные стороны счетной апертуры. Рис. 3. Гидродинамическое фокусирование Апертуро-импедансный метод позволяет определять большинство эритроцитарных и тромбоцитарных показателей, связанных с объемом клеток, а также является основой для дифференцировки лейкоцитов по трем параметрам. ГЛАВА 2. СПЕЦИАЛЬНАЯ ЧАСТЬ 2.1 Подсчет эритроцитов и тромбоцитов, расчет величины гематокрита, эритроцитарных и тромбоцитарных индексов Разделение эритроцитов и тромбоцитов в современных анализаторах проводится по измерению амплитуды электрического сигнала: тромбоциты (небольшие по размеру клетки) при прохождении измерительного канала генерируют электрические импульсы низкой амплитуды, а сравнительно большие клетки - эритроциты и лейкоциты - импульсы высокой амплитуды. После лизиса эритроцитов в суспензии остаются лейкоциты. Из первого счета импульсов высокой амплитуды вычитают импульсы высокой амплитуды второго счета (лейкоциты). Разница импульсов высокой амплитуды до и после лизиса соответствует количеству эритроцитов - RBC (Red Blood Cells). Устройство, разделяющее импульсы по величине амплитуды, называется дискриминатор. В современных анализаторах применяются многоканальные дискриминаторы, позволяющие получить детальную информацию о размерах клеток в виде гистограмм. Дискриминатор – устройство, преобразующее изменение контролируемого параметра электрического сигнала (на входе) в изменение полярности напряжения (на выходе). Амплитудный дискриминатор выдаёт импульс на выходе, когда амплитуда входного сигнала превышает порог дискриминации Uпор. Обычно имеется возможность изменять порог дискриминации в широких пределах и тем самым отделять для последующей регистрации импульсы определённых амплитуд. В дискриминаторе сравниваются значения параметра (амплитуды, длительности, полярности, частоты, фазы) входного сигнала с номинальным значением этого параметра опорного источника сигнала. В результате сравнения на выходе дискриминатора возникает разностное напряжение рассогласования. Его амплитуда и полярность определяются степенью и знаком отклонения значения данного параметра входного сигнала от номинального. Рисунок 4. Простая дискриминация импульсов по амлитуде Амплитудный дискриминатор имеет определённый уровень срабатывания и пропускает только сигналы с амплитудой выше (ниже) номинального значения. Амплитудный дискриминатор – один из основных узлов спектрометрической аппаратуры, используемой для амплитудного анализа импульсов напряжения, пропорциональных энергии ядерного излучения. Дискриминатор предназначен для пропускания импульсов последующие устройства анализатора только с определёнными амплитудами. Сигналы некоторых детекторов несут информацию об энергии зарегистрированного кванта или частицы: их амплитуда пропорциональна энергии. Поэтому, исследуя распределение амплитуд импульсов нетрудно получить спектр излучения. В простейшем случае такие измерения могут быть выполнены также с помощью амплитудного дискриминатора. Для этого производится подсчёт импульсов на выходе дискриминатора при разных порогах срабатывания в течение одинаковых интервалов времени. Получаемая при этом кривая n=f(Uпор) называется интегральным амплитудным спектром. Рисунок 5. Амплитудные спектры: а) – интегральный б) - дифференциальный Каждая точка кривой показывает, какое число импульсов имеет амплитуду А, превышающую порог срабатывания Uпор дискриминатора. По форме интегральной кривой можно судить о составе спектра исследуемого излучения. При суммировании амплитуд импульсов, получаемых при подсчете количества эритроцитов, получается величина, отражающая общий объем, занимаемый эритроцитами, то есть гематокрит Hct. Разделив гематокритную величину на концентрацию эритроцитов (RBC), получается полезная характеристика эритроцитов - средний объем MCV (mean corpuscular volume). Аналогичные показатели можно получить и для тромбоцитов: концентрация тромбоцитов - PLT (platelet), тромбокрит - РСТ (platelet crit), средний объем тромбоцитов - MPV (mean platelet volume). В норме концентрация эритроцитов в крови на 3 порядка превышает концентрацию лейкоцитов, вклад лейкоцитов в общее количество подсчитываемых клеток пренебрежимо мал по сравнению с эритроцитами, поэтому в некоторых анализаторах за количество эритроцитов принимают общее подсчитанное количество клеток. Такое допущение справедливо, за исключением случаев явных лейкоцитозов. 2.2 Подсчет и дифференцировка лейкоцитов Определение количества лейкоцитов возможно только после лизиса эритроцитов. Эта задача оказалась легко решаемой, так как свойства мембран эритроцитов и лейкоцитов существенно различаются. Эритроциты легко лизируются под воздействием многих поверхностно-активных веществ, при этом лейкоциты, хотя и претерпевают некоторые изменения, остаются целыми. Поэтому при подсчете лейкоцитов, прежде чем пропустить разведенную суспензию крови через апертуру датчика, к ней добавляют лизирующий раствор или гемолитик, эритроциты разрушаются до очень мелких фрагментов, которые при подсчете лейкоцитов генерируют электрические импульсы очень низкой амплитуды, не влияющие на результат анализа. Разделение неизмененных лейкоцитов кондуктометрическим методом на основные субпопуляции невозможно в виду близости их объемов, однако можно подобрать такую композицию растворителя и гемолитика, что различные формы лейкоцитов претерпевают изменения размеров в разной степени и, благодаря этому, могут разделяться данным методом. Изменение объема клетки зависит от многих факторов, включающих величину и форму ядра, объем цитоплазмы, наличие внутриклеточных включений и т.д., поэтому размер трансформированных клеток не соответствует размерам клеток при визуальном просмотре их в окрашенном мазке крови (таблица 1). Таблица 1 - Соотношение размеров клеток в окрашенных мазках крови и в приборах после обработки их лизирующим реагентом Тип клеток Размер клеток при визуальном анализе мазков крови Размер клеток после обработки лизатом Лимфоциты малый малый Базофилы средний средний, малый Эозинофилы средний средний, большой Моноциты наибольший средний Нейтрофилы средний большой, средний Патологические формы клеток различный различный Полученные после анализа лейкоциты распределяются на гистограмме следующим образом: - Область малых объемов (35-90 фл) формируется лимфоцитами, которые под действием гемолитика значительно уменьшаются в объеме. - Гранулоциты (нейтрофилы, базофилы и эозинофилы), напротив, подвергаются небольшому сжатию и расположены в области больших объемов (120-400 фл). - Между двумя пиками имеется зона так называемых "средних лейкоцитов" (90-120 фл), которая лучше всего коррелирует с моноцитами (по этой причине в некоторых анализаторах клетки в этой области указываются как моноциты). Однако, коэффициент корреляции с моноцитами R = 0,5-0,8 сравнительно невысок, более корректным является название параметра "средние лейкоциты" MID. Практически в область средних клеток могут частично попадать базофилы, эозинофилы, различные патологические формы. 2.3 Основные реагенты кондуктометрических анализаторов Основными составляющими комплектов реагентов для кондуктометрических гематологических анализаторов являются: а) изотонический разбавитель; б) лизирующий раствор; А) Изотонический разбавитель - это буферный раствор с фиксированными параметрами рН, электропроводности и осмолярности. Слово «изотонический» указывает только на одно и не самое важное свойство реагента – поддержание требуемого осмотического давления с целью обеспечения постоянства объема клеток крови. Дело в том, что эритроциты принимают тот объем, который им диктует осмолярность раствора. При увеличении осмолярности эритроциты сжимаются до некоторого равновесного объема. Если осмолярность раствора уменьшается, объем эритроцитов, соответственно, увеличивается. Таким образом, средний объем эритроцитов (MCV) увязывается с осмолярностью изотонического разбавителя. Стабилизирующие добавки в изотоническом разбавителе должны обеспечивать сохранность форменных элементов крови в течение достаточно длительного. Присутствие в растворе антикоагулянта должно эффективно предотвращать образование фибриновых сгустков и агрегацию тромбоцитов. В случае гематологических анализаторов, проводящих дифференциацию лейкоцитов на три популяции, изотонический разбавитель содержит специальные добавки, модифицирующие мембраны лейкоцитов. Б) Лизирующий раствор - гемолитик, который при добавлении в разведение крови приводит к лизису эритроцитов и в то же время сохраняет лейкоциты.
Не смогли найти подходящую работу?
Вы можете заказать учебную работу от 100 рублей у наших авторов.
Оформите заказ и авторы начнут откликаться уже через 5 мин!
Похожие работы
Курсовая работа, Автоматизация технологических процессов, 39 страниц
468 руб.
Курсовая работа, Автоматизация технологических процессов, 27 страниц
324 руб.
Курсовая работа, Автоматизация технологических процессов, 31 страница
300 руб.
Курсовая работа, Автоматизация технологических процессов, 36 страниц
300 руб.
Курсовая работа, Автоматизация технологических процессов, 30 страниц
200 руб.
Служба поддержки сервиса
+7(499)346-70-08
Принимаем к оплате
Способы оплаты
© «Препод24»

Все права защищены

Разработка движка сайта

/slider/1.jpg /slider/2.jpg /slider/3.jpg /slider/4.jpg /slider/5.jpg